ELISA試劑盒試驗固相載體的選擇：很多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。
包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，懇求純度要好,吸附時通常懇求PH在9.0～9.6之間。
吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,通常多選用4℃ 18～24小時。
有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應留心防護。
其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等。
如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
不管何種載體，在運用前均可進行選擇：用等量抗原包被，在同一試驗條件下進行反應，查詢其顯色反應是不是均一性，據此判明其吸附功能是不是出色。
正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證試驗作用的性。

ELISA試劑盒試驗條件的選擇
在ELISA中，進行各項試驗條件的選擇是很首要的，其間包括:
有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是如今較為滿意的供氫體。
底物作用一段時間后，應參與強酸或強堿以中止反應。
通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。
底物運用液有必要新鮮制造，尤其是H2O2在臨用前參與。
然后再固定其它條件或采納“方陣法”（包被物、待檢樣品的參看品及酶符號抗體分別為不一樣的稀釋度）在正式試驗系統里地滴定其工作濃度。
有時本底較高，說明有非特異性反應，可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇懇求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。
蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不一樣的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相一起，查詢陽性標本的OD值。
選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。

ELISA試劑盒試驗酶符號抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定（見酶符號抗體部份）。